缓冲液是一种可以抵抗溶液中因加入少量酸、碱而产生的ph变化的液体。一般由弱酸及其弱酸盐或者弱碱及其弱碱盐配制而成。生物的生化反应，很多都需要一个稳定ph环境才能发生，比如血液就是一种缓冲体系。除了ph会影响生化反应效率外，缓冲液中的某些离子也可能会产生一些不必要的反应，妨碍目标实验的正常进行。因此在生命科学领域的实验中，研究者们需要慎重地选择缓冲体系。本期就为大家整理一些常用缓冲液的配制方法。
磷酸缓冲液（pbs）
pbs的缓冲ph值范围非常广，可配置各种ph值的酸、碱、中性缓冲液，是最常见的缓冲体系之一。
配制酸性磷酸缓冲液可直接用nah₂po₄或kh₂po₄，ph范围在1-5；碱性缓冲液可直接用na₂hpo₄或k₂hpo₄，ph范围在9-12；中性缓冲液则用等浓度的nah₂po₄和na₂hpo₄或者等浓度的nah₂po₄和na₂hpo₄溶液混合，ph在5.5-8.5。
pbs的缓冲能力强，应用范围广，但也有缺点：
① 易与常见的钙离子ca²⁺、镁离子mg²⁺等重金属离子结合形成沉淀。
② 会抑制某些反应，比如抑制某些酶的催化作用。
以0.2mol/l中性磷酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（缓冲液的摩尔浓度指的是磷酸根的浓度，所以若稀释后ph值有微小变化需要调整，不要用带有磷酸根的溶液）：
磷酸氢二钠（na₂hpo₄*，0.2mol/l）：28.39g/l；
磷酸二氢钠（nah₂po₄*，0.2mol/l）：24g/l
*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。
不同ph的pbs可由不同比例的上述溶液混合而成。
配制100ml pbs缓冲液所用量如下图所示：
硼酸缓冲液（bbs）
bbs一般由硼砂和硼酸配制，是碱性范围内常用缓冲液。bbs的缺点是能和很多代谢产物生成络合物，比如和糖反应形成稳定的复合物而导致缓冲能力下降。
以0.2mol/l硼酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（如需后续调整ph，同磷酸缓冲液一样，不要用含有硼酸根的溶液）：
硼砂（na₂b₄o₇·10h₂o*，0.2mol/l）：76.27g/l；
硼酸（h₂bo₃*，0.2mol/l）：12.37g/l
*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。
不同ph的bbs可由不同比例的上述溶液混合而成。
配制10ml bbs缓冲液所用量如下图所示：
需要注意的是：硼砂易失去结晶水，必须保存在带塞子的瓶中。
碳酸缓冲液（cbs）
cbs一般由碳酸和碳酸氢钠配制，多为碱性。
以0.2mol/l碳酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（ph调整，同上）：
碳酸钠（na₂co₃*，0.2mol/l）：21.2g/l；
碳酸氢钠（nahco₃*，0.2mol/l）：16.8g/l
*注意是否为水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。
不同ph的cbs可由不同比例的上述溶液混合而成。
配制50ml cbs缓冲液所用量如下图所示：
柠檬酸缓冲液（cpbs）
cpbs一般由碳酸和碳酸氢钠配制，常用于分子实验的杂交处理液和细胞实验中的抗原修复、暴露等。柠檬酸容易与钙离子结合产生沉淀，反应中应避免钙离子混入。
以0.2mol/l柠檬酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（ph调整同上）：
柠檬酸（c₆h₈o₇*，0.2mol/l）：38.4g/l；
柠檬酸钠（c₆h₅na₃o₇*，0.2mol/l）：51.6g/l
*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。
不同ph的cpbs可由不同比例的上述溶液混合而成。
配制20ml cpbs缓冲液所用量如下图所示：
good's缓冲液
good's缓冲液又称为两性离子缓冲液。由于不干扰生物化学反应过程，对酶反应等也无抑制作用，所以非常适合于对易变性或者ph敏感型蛋白的研究和实验。常用的good's缓冲液有20多种，这里只简述在生命科学实验中最常见的三种。
1. mes缓冲液
mes可固体按照摩尔浓度计算用量，配成液体后，通过氢氧化钠来调整ph。
以0.2mol/l mes缓冲液为例：
mes（c₆h₁₃no₄s*，0.2mol/l）：39.05 g/l；
*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。
常用有效缓冲范围为ph5.5-7.7。
2. tris缓冲液
①tris-hcl缓冲液
tris固体按照摩尔浓度计算用量，配成液体后，通过hcl来调整ph。
以0.2mol/l tris-hcl缓冲液为例：
mes（c₄h₁₁no₃*，0.2mol/l）：24.2 g/l；
*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量
②tris-edta缓冲液
常用于分子生物学实验研究，用于dna的溶解和保存等。
以1×te缓冲液(ph8.0)为例：
●1m tris-hcl（ph8.0）：称取tris12.12g，加纯化水80ml溶解，滴加浓hcl调整ph至8.0，后定容至100ml。
●1m edta（ph8.0）：称取edta-na₂·h₂o 18.6g，加纯化水40ml，剧烈搅拌，滴加naoh溶液调整ph至8.0，固体物质充分溶解后，定容至50ml（edta-na₂需在ph8.0时才会溶解）。
●1×te（10mm tris-hcl，1mm edta，ph8.0）：量取10ml 1m tris-hcl，1ml 1m edta溶液，充分混匀后，定容至1l
③tae缓冲液
将上述tris-edta缓冲液调整ph的盐酸换成冰乙酸，即是tae缓冲液。
注意：
1. tris溶液会吸收空气中的二氧化碳，所以应保存在使用塞子的瓶中。
2. tris缓冲液在不同温度下，呈现的ph是不同的，配置时应考虑使用环境，最好在使用环境温度条件下进行配制。
3. hepes缓冲液
缓冲范围在中性附近。由于可以在敞开式容器中保持稳定的ph，所以常用于细胞培养，或者诊断试剂的保存溶液。
以1m，ph7.0的hepes溶液为例：
hepes称取119.15g，溶解在400ml纯化水中，用naoh溶液调整ph至7.0，后定容至500ml。
tips
缓冲液是弱酸及其弱酸盐或弱碱及其弱碱盐形成的共轭体。其对ph变化的缓冲能力，和酸碱的比例、解离常数等有关。酸碱的摩尔比越接近1:1，缓冲能力越大。在ph= pka±1的范围内，缓冲能力最佳。
配制缓冲液时，应根据需要的ph，选择相应的缓冲液。有些工作人员用强酸，强碱将缓冲液快速调整至所需要的ph值。殊不知这样ph虽然达到了，却也破坏了其缓冲体系，使缓冲液失去了缓冲作用。